聚合酶链式反应（PCR）是一种用于放大扩增特定的DNA片段的分子生物学技术
，它可看作是生物体外的特殊DNA复制，PCR的最大特点是能将微量的DNA大幅增加
。目前 ，PCR成为分子生物学研究必不可少的一部分。实时荧光定量PCR（Quantitative Real-time PCR）技术
，是指在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程 ，最后通过标准曲线对模板进行定量分析的方法 。该项技术可以对DNA、RNA样品进行相对定量 、绝对定量和定性分析
，提高了普通PCR技术的特异性和准确性，被广泛应用于基础研究
、疾病诊断、农业检测和法医调查等领域。

一 、常规PCR

利用DNA分子会在体外95°高温时会发生变性解旋变成单链 ，然后降温到60°C左右时引物会与单链DNA按碱基互补配对原则结合，接着再升高温度到72°C左右
，即DNA聚合酶最适反应温度，DNA聚合酶会沿着磷酸到五碳糖（5'-3'）的方向合成相应的互补链 ，如此循环往复以达到DNA分子扩增的目的
，常规PCR技术无法实现精确定量
。

二
、实时荧光定量PCR

如要对DNA、RNA样品进行精确定量研究，就需要采用实时荧光定量PCR ，根据检测实时荧光PCR产物的方式不同
，实时荧光定量PCR主要有DNA结合染料法 、基于探针的化学法、淬灭染料引物法等类型。

1.? DNA 结合染料法

原理 ：应用一种带有荧光的
、非特异的DNA结合染料检测PCR过程中积累的扩增产物 。

应用于核算定量和基因表达验证
。

优缺点： 它们的优点是可以对任何双链DNA 进行定量，不需要探针 ，具有相对高的灵敏度和可靠性
，并且成本低，简单易用 ，缺点是它们能在反应中结合所有的DNA双链
，其中包括在