则在3’末端 ，PCR扩增时在加入引物的同时加入探针
，探针完整时，荧光信号被淬灭基团吸收 ，PCR扩增时
，5’→3’外切酶活性将探针酶切降解，使荧光基团和淬灭基团分离 ，从而检测器可以接收到荧光信号
。

3.? 淬灭染料引物法

原理： 采用荧光标记引物扩增
，从而使荧光标记基团直接掺入PCR扩增产物中，依赖荧光能量共振传递。

应用于核酸定量 、基因表达验证
、等位基因鉴别、SNP分型 、病原体和病毒检测
、多重PCR

优缺点：探针和目标片段的特异性结合产生荧光信号 ，因此减少了背景荧光和假阳性
，还可进行多重PCR扩增，缺点是原料成本价格高

三、实时荧光PCR仪

实时荧光PCR系统包括热循环仪 ，用于荧光激发的光学系统以及用于收集荧光数据和管理分析的计算机软件，数据通过实时分析软件以图表的形式显示 。

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